一、开机前准备

1.检查实验室电源、温度和湿度等环境条件，实验室温度保持在10～40℃之间，湿度小于80%；

2.根据需要选择合适色谱柱。在容器中放入已过滤脱气好的流动相，把吸滤过滤头放入容器中；

3.检查仪器各部分是否正常，连线是否正确，清洗用的超纯水或乙醇是否需要更换。

二、开机

1.开机，待仪器自检完成后，按操作规程先用大流量流动相清洗管路，赶尽气泡，再清洗自动进样器和针头，然后换上流动相，接好色谱柱，并用适当流量冲洗；

2.打开微机，双击桌面上的Millennium 32图标进入工作站系统；

3.凝胶色谱测试时，调流速必须以0.1ml/min速度慢慢升或降，不能过快以免损坏柱子。

三、编缉HPLC仪器分析方法

1.在Millennium 32界面中，点login，进入后选择project，在Run Samples中选择方法，连接仪器；

2.设置各仪器参数，等待整个系统平衡；

3.保存所编辑的方法。

四、样品分析与采集

1.当色谱柱、系统平衡，基线稳定后，方可进样分析；

2.设置好样品信息，按Inject，开始采集样品。

五、报告输出

1.数据采集完毕后，进入Review Data即可进行数据分析；

2.进入Report Data即可进行报告打印。

六、关机

1.实验完毕后，选用合适的流动相冲洗管路和色谱柱；

2.退出工作站，关闭整个系统。关机时，先关检测器电源开关，关泵，再关仪器电源开关，最后才关稳压电源；

3.在记录本上记录使用情况。

注意事项：

1.所有溶剂的纯度必须不低于AR级,在使用前用小于0.5；

2.流动相中如含有缓冲盐，停泵前必须先用水将缓冲盐冲洗干净，再用有机溶剂冲洗；水相流动相需经常更换，防止长菌变质；

3.所有样品必须能完全溶解在流动相中，进样前用小于0.5；

4.色谱柱用合适的溶剂保存，如C18柱推荐用甲醇保存。